Потпуно аутоматска машина за екстракцију и детекцију нуклеинских киселина Нев Тецх-а

Пет снага:
● Инструмент конфигурисан са екстракцијом нуклеинске киселине и кораком пречишћавања
● Инструмент конфигурисан са ултразвучним модулом за екстракцију
● Инструмент је конфигурисан са потпуно аутоматским
● Инструмент конфигурисан са променљивим температурним појачањем
● Инструмент је конфигурисан са потпуно затвореним комплетом реагенса

1. Да ли реагенсе за детекцију нуклеинске киселине треба екстраховати и пречистити?
Принцип детекције нуклеинске киселине је следећи: под дејством прајмера, ДНК полимераза се користи за амплификацију ланчане реакције на шаблону ДНК/РНА (захтева реверзну транскрипцију НА), а затим се детектује количина ослобођеног флуоресцентног сигнала да би се одредила да ли узорак садржи нуклеинску киселину (ДНК/РНК) патогена који треба да се открије.

1) Узорци који нису екстраховани или пречишћени могу садржати многе компоненте које утичу на коначни резултат: нуклеазу (која може да раствори циљну нуклеинску киселину и изазове лажно негативну), протеазу (која може да смањи ДНК полимеразу и изазове лажно негативна), тешки метал соли (која доводи до инактивације синтазе и изазива лажно позитивну), превише кисела или превише алкална ПХ (што може проузроковати неуспех реакције), непотпуна РНК (што доводи до неуспеха лажно негативне реверзне транскрипције).

2) Неке узорке је тешко директно амплифицирати: Грам-позитивне и неке паразите, због њихових дебелих ћелијских зидова и других структура, ако не прођу кроз процес екстракције и пречишћавања нуклеинске киселине, комплет без екстракције може пропасти за такве Узорци.

Због тога се препоручује да изаберете комплет за тестирање или инструмент који је конфигурисан за корак екстракције нуклеинске киселине.

2. Хемијска екстракција или физичка ултразвучна фрагментација?
Уопштено говорећи, хемијска екстракција се може применити на већину претходног третмана и пречишћавања.Међутим, код грам-позитивних бактерија са дебелим зидовима и неких паразита, такође је случај да хемијска екстракција не може да добије ефикасне шаблоне нуклеинских киселина, што резултира лажно негативном детекцијом.Поред тога, хемијска екстракција често користи јаке агенсе, ако елуирање није темељно, лако је увести јаке алкалије у реакциони систем, што резултира нетачним резултатима.

Ултразвучна фрагментација користи физичко дробљење, што је успешно користио ГенеКсперт, водеће предузеће у области ПОЦТ за људску употребу, и има апсолутну предност у екстракцији нуклеинске киселине неких сложених узорака (као што је Мицобацтериум туберцулосис).

Због тога се препоручује да се изабере комплет за тестирање или инструмент који је конфигурисан са кораком екстракције нуклеинске киселине.а оптимално је ако постоји модул за ултразвучну екстракцију.

3. Ручни, полуаутоматски и потпуно аутоматски?
Ово је проблем цене рада и ефикасности рада.Тренутно, болнице за кућне љубимце немају довољно особља, а екстракција и детекција нуклеинске киселине је посао који захтева одређене вештине и искуство.Нема сумње да је потпуно аутоматска машина за екстракцију и детекцију нуклеинске киселине савршен избор.

4. Појачавање константне температуре или променљиво повећање температуре?
Реакција амплификације је веза за детекцију нуклеинске киселине, а професионална технологија укључена у ову везу је сложена.Грубо говорећи, ензими се користе за амплификацију нуклеинске киселине.У процесу амплиfiкације, детектује се појачани флуоресцентни сигнал или уграђени флуоресцентни сигнал.Уопштено говорећи, што се раније појави флуоресцентни сигнал, то је већи садржај циљног гена у узорку.

Амплификација са константном температуром је амплиfiкација нуклеинске киселине на фиксној температури, док је амплиfiкација променљиве температуре циклична амплиfiкација стриктно у складу са денатурацијом – жарењем – екстензијом.Време појачања константне температуре је спроведено, док на време појачања променљиве температуре у великој мери утиче брзина пораста и пада температуре инструмента (тренутно су многи произвођачи били у могућности да ураде 40 циклуса појачања за око 30 минута).

Ако су лабораторијски услови добри и зонирање строго, разумно је рећи да разлика у тачности између њих неће бити велика.Међутим, променљива температурна амплиfiкација ће синтетизовати више производа нуклеинске киселине за релативно краће време.За лабораторије без строгог зонирања и стручног особља за обуку, ризик од цурења аеросола нуклеинске киселине ће бити већи, лажно позитиван се јавља када дође до цурења, а што је изузетно тешко елиминисати.

Поред тога, амплиfiкација са константном температуром је такође склонија неспецифичној амплиfiкацији када је узорак сложен (релативна температура реакције је нижа, а што је виша температура екстензије, то је боља специфичност везивања прајмера).

Што се тиче тренутне технологије, променљиво појачање температуре је поузданије.

5. Како избећи ризик од цурења продуката амплификације нуклеинске киселине?
Тренутно, многи произвођачи бирају ПЦР епрувету типа жлезде као реакциону цев нуклеинске киселине, која је запечаћена трењем, а денатурација температуре у денатурацији променљиве температуре у ПЦР амплиfiкацији променљиве температуре достиже 90 степени.
Центиграде .Поновљени процес експанзије са топлотом и контракције са хладноћом представља велики изазов за заптивање ПЦР цеви, а ПЦР цев са жлездама релативно лако може изазвати цурење.

Пожељно је усвојити реакцију са потпуно затвореним комплетом/цевом како би се избегло цурење реакционог производа.Било би савршено када би се могао израдити потпуно затворен комплет за екстракцију и детекцију нуклеинске киселине.

Дакле, нова потпуно аутоматска машина за екстракцију и детекцију нуклеинских киселина Нев Тецх-а има горњих пет оптималних избора.